用于提取目标分析物例如蛋白质和核酸。
蛋白质是科学研究的重要目标。它们用作疾病的生物标志物，用于治疗目的的靶标，并且在活生物体中提供基本的生理功能。样品蛋白质组的提取和回收通常是蛋白质组学研究的步。然而，组织成分变异性为开发通用提取方法产生了显着的障碍。虽然软组织类型更容易破坏，但是硬组织例如骨，皮肤和肌肉难以快速破坏而不降解感兴趣的分析物。
传统破碎方法可包括在苛性化学品存在下孵育或在低温条件下粉碎。 1,2为了获得的蛋白质回收率，需要一种高效和可重复的方法，可在多种样品类型中有效。
在这里，我们证明从韧性组织通过珠磨在珠粒Ruptor 24蛋白质提取。
材料和方法
所有大鼠组织获自Bioreclamation，Inc。手动切割皮肤，尾巴，舌头和背部肌肉样品，并置于装有5个2.8mm陶瓷珠（目录号19-628）的2mL增强聚丙烯管中。向每个管中加入1mL的Tris-HCl，pH 7.6，并将样品在如表1所述的Bead Ruptor 24上匀化
将均质化的混合物立即在8,000g下离心10分钟。使用1.2μl上清液在Nanodrop分光光度计上测定280nm处的蛋白质浓度（表1）。
将10μl蛋白质提取物与5μlLaemmli样品缓冲液混合，在90℃加热10分钟，然后通过在4-20％Tris甘氨酸SDS聚丙烯酰胺凝胶上200V电泳30分钟分离蛋白质。蛋白质用考马斯染色并在GelDoc EZ系统（BioRad）上显现。
表1样品量
和Bead Ruptor 24设置
样品类型速度循环
（mg）（m / s）时间（s）
皮肤（90）7.3 45s
尾（70）6 45秒
舌（90）7.45 3×30秒
背部肌肉（45）6 45秒
骨（250）6.95 8 x 45秒
（45s停留）
结果
从皮肤和肌肉等坚韧组织中提取蛋白质是蛋白质组学研究的一个重大挑战和瓶颈。传统方法
因为化学裂解或者循环沉积是不可再现的并且难以规模化。珠磨机，如Bead Ruptor 24中所支持的，增加蛋白质提取产量，并使韧性生物组织均质化。
在该研究中，将大鼠皮肤，尾，舌，肌肉和骨组织在Bead Ruptor 24中匀浆，并通过分光光度法定量蛋白质产量。表2表明珠研磨导致来自所有组织类型（包括骨）的高蛋白产量。
进一步分离蛋白提取物并通过SDS-PAGE显色（图1）。皮肤和尾部产生非常相似的蛋白质谱，因为两种组织类型是相似的，因为尾部主要由皮肤组织组成。舌组织需要量的力产生完全匀浆，产生显着的蛋白质产量和其可视化蛋白质之间的分子量变化（表2，图1）。
从骨样品中提取蛋白质代表了的挑战，并且通常通过化学脱钙方法实现。在该研究中，通过珠磨直接实现完全均质化，而不需要乏味的化学裂解过程。通过珠磨过程（表2，图2）获得高蛋白产量和广泛的蛋白库。
图2在坚韧组织的蛋白质凝胶电泳。聚丙烯酰胺SDS PAGE电泳的蛋白质提取。泳道1：蛋白质梯。泳道2：皮肤。泳道3：尾。泳道4：背部肌肉。泳道5：舌头。
图3蛋白质凝胶电泳对骨蛋白提取物。聚丙烯酰胺SDS PAGE电泳的骨蛋白提取。泳道1：蛋白质梯。
泳道2：骨蛋白提取物。
泳道3：骨蛋白提取物的2X稀释液。
泳道4：骨蛋白提取物的3X稀释液。
表2样品类型和蛋白产量
样品类型蛋白产量（μg/μL）
皮肤2.374
尾18.204
舌1.286
背部肌肉14.395
骨0.722
结论
Bead Ruptor 24有助于从韧性组织和骨骼中快速提取蛋白质
